荧光分子探针具有结构可变，合成简单和易于修饰等特点，被广泛应用于核酸、酶、蛋白质及细胞等生物分析物的检测中，是分子诊断中不可或缺的研究工具。随着PCR检测技术的发展，对荧光探针的灵敏度、荧光强度、背景信号等指标要求也越来越高。当qPCR探针长，信噪比差时，该怎么办呢？

随着探针长度的增加，单淬灭探针的淬灭效果减弱，双淬灭探针的出现很好的解决了这个问题。常规探针在 5' 端有一个荧光基团，在 3' 端有一个淬灭基团。必威科技双淬灭探针在常规探针内部增加一个淬灭基团，减少荧光“泄露”现象，在实验中可获得更低的荧光背景信号，提高检测的灵敏度。

必威科技双淬灭探针与淬灭基团选择列表

通常情况下，SYNO Q1 用于在480-580nm范围内的淬灭，可与常用荧光基团配合使用，如FAM、VIC和HEX等；SYNO Q2 用于在550-650nm范围内的淬灭，如ROX、TXR、TAMRA、CY5和ATTO 647等荧光基团最为有效。

高质量的荧光探针可显著提高试验效率和检测准确性。荧光探针的评价标准主要包括：选择性、灵敏度、响应速度、荧光增强倍数、稳定性和生物相容性等。常规核酸探针只有一种效应淬灭荧光！淬灭基团对荧光基团的淬灭能力是有距离限制的，当淬灭基团与荧光基团距离较近时，淬灭效果好，当淬灭基团与荧光探针距离较远时，淬灭效果差，背景荧光信号会增强。双淬灭探针可有效解决“距离”问题，让qPCR试验如虎添翼！

常规探针与双淬灭探针对比

双淬灭TaqMan探针应用于新型冠状病毒核酸检测的初步研究

伍嘉豪, 张嫦丽, 王娴默, 范文, 易华伟

在核酸检测中，由于采样和qPCR灵敏度问题，假阴性结果经常发生。为了提升对SARS-CoV-2核酸的检测效果，研究人员开发了一种双淬灭TaqMan探针，其含有两个淬灭基团。与单淬灭TaqMan探针相比，双淬灭TaqMan探针的背景荧光信号更低（161±9 vs 290±18）。此外，研究表明，双淬灭TaqMan探针检测系统具有更好的检测精度（CV 1.4% vs 2.3%; 0.6% vs 2.1%）和更低的检测下限。

单淬灭和双淬灭 TaqMan 探针示意图及探针的荧光信号检测

双淬灭荧光探针在肠癌患者肠道菌群qPCR检测中的应用

臧彩霞,奚晓华,朱会芳等

研究者探讨了双淬灭荧光探针在肠癌患者肠道菌群荧光定量（qPCR）检测中的应用效果。通过接受手术的42例肠癌患者研究组与健康体检成人38例对照组，收集标本，用常规 qPCR和双淬荧光探针qPCR检测肠道菌群的表达量。结果研究组的胆汁酸、血清总胆汁酸、次级胆汁酸均高于对照组（P＜0.05）。研究表明，双淬灭荧光探针检测肠道菌群、 胆汁酸的方法便捷，结果准确，对鉴别及筛查早期肠癌患者有指导意义，值得临床推广。

参考文献

[1] Marras SA, Kramer FR, Tyagi S. Efficiencies of fluorescence resonance energy transfer and contact-mediated quenching in oligonucleotide probes. Nucleic Acids Res. 2002 Nov 1;30(21):e122.

[2] 伍嘉豪, 张嫦丽, 王娴默, 范文, 易华伟. 双淬灭TaqMan探针应用于新型冠状病毒核酸检测的初步研究[J]. 病毒学报, 2022, 38 (04): 784-790.

[3] 臧彩霞,奚晓华,朱会芳等.双淬灭荧光探针在肠癌患者肠道菌群qPCR检测中的应用[J].临床医学工程,2023,30(09):1199-1200.

[4] 张园,张海霞.核酸探针及其在生物分析中的应用[J].分析试验室,2020,39(09):1002-1012.