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CRISPR基因编辑筛选一站式服务

必威生物提供CRISPR一站式基因编辑服务，包括sgRNA序列设计、芯片合成、文库构建、NGS验证、病毒包装、文库细胞pool构建、高通量筛选和生信分析等。我们成功交付动植物和微生物等30+物种类型，数百个高质量CRISPR sgRNA文库，满足不同客户对文库的定制化需求，提供基因功能筛选全套解决方案。

服务优势

数十种模式物种，定制化sgRNA设计
丰富的sgRNA表达载体，提供转染级质粒
正确率> 80%-99%
覆盖度>99%
均一性< 1.6-10
从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务

服务详情

服务项目

服务详情

周期
sgRNA设计

针对目标基因群进行sgRNA序列设计(条数可选)

1-2周
芯片合成

将所设计的所有sgRNA及阴性对照合成在一张芯片上

3-4周
sgRNA文库构建

将sgRNA构建到客户的目标载体上

2-3周
文库质粒大抽

根据发货量进行转染级质粒抽提

1周
文库质检及NGS验证(可选)

库容量大于100x

文库正确率大于80%

文库的均一性指标小于10

2-3周
病毒包装(可选)

慢病毒包装，病毒滴度: 10⁸TU/ml

2-3周
文库细胞pool构建

抗性筛选测试

慢病毒量及细胞数评估

抗性筛选

NGS检测

6-9周
高通量筛选

正向筛选实验、反向筛选实验

2-3周
药物抗性实验、报告基因检测

在线咨询

服务流程

案例分享查看详细

CRISPR sgRNA文库构建与筛选应用实例

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

已知药物功能筛选其耐药靶点的方案：

1.明确该药物功能及其致死工作浓度。

2.构建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞，构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。

3.筛选：高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆，成活的细胞即为产生耐药性的细胞，其耐药性的产生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。

4.存活的细胞通过二代测序，比对得到gRNA 信息，从而推断出起作用的基因靶点。

常见问题

基因编辑是对质粒还是基因组进行编辑？目前我们已经构建的成熟的编辑系统，涉及到的物种有哪些？按实验目的，可以分为哪几类？

基因编辑是对基因组进行编辑。目前已经成熟的物种有大肠杆菌，酿酒酵母和毕赤酵母。

按实验目的可分为：基因敲入、基因敲除、点突变。

CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12的优劣势是？

简单来说，原核基因编辑相差不大，我们目前使用的是CRISPR/Cas9基因编辑。真核Cas12a更有优势。

与Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，质粒或蛋白更容易进入细胞

2 从经济方面来讲，Cas12a用crRNA进行编辑，crRNA约40-44nt，其合成的价格远低于sgRNA(约100nt)

3 识别位点PAM序列不同。Cas12a核酸酶识别5’-TTTV，切割产生交错末端。Cas9切割产生平末端

基因编辑的方法分类是？

1.同源重组

2.核酸酶

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